口蹄疫O型、A型二價滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株+Re-A/WH/09株）

疫苗回溫是指疫苗從冰箱內取出后，將疫苗溫度從2～8℃升溫至20~25℃，再給豬群免疫，以減少對豬的應激?？梢允褂盟』販?、自然回溫、手握回溫等方法。

1、水浴回溫法：將水浴鍋溫度設置為35℃（也可在水盆中加溫水），將從冰箱中取出的疫苗瓶放入水浴鍋中，約8分鐘（水浴溫度25℃時，約需20分鐘）疫苗即可回溫至20℃。

2、手握回溫法：疫苗從冰箱中取出后，用雙手握住疫苗瓶使疫苗回溫，約10分鐘疫苗即可回溫至20℃。

3、自然回溫法：疫苗從冰箱中取出后，將疫苗放置在室溫環境中，避免陽光直射，使疫苗回溫。環境溫度為26℃時，回溫到20℃約需41分鐘。環境溫度為37℃時，回溫到20℃約需13分鐘。

1、技術人員應以有序、安靜的方式進行接種，對懷孕母豬和仔豬動作輕柔、小心。

2、對三月齡內的豬只最好的保定方式是抓住其前肢使豬兩后肢站立；年齡、體重較大的豬，可將其擠于豬圈的一角加以保定；已接種豬只做好標記，避免漏接。

3、注射部位剪毛后用70～75%酒精棉或碘酊擦凈消毒，再用擠干的酒精棉擦干消毒部位。

4、疫苗要注入豬耳根后的深層肌肉內，注射時避開耳道。注射時針頭與皮膚表面呈90度，避免疫苗液流出。

5、嚴禁“飛針”方式注射疫苗，這樣容易造成注射劑量不準確，注射部位不準確。

6、一支注射器只能用于一種疫苗的接種，接種時針頭要逐頭更換。

7、在免疫過程中需要暫停接種時，應低溫保存疫苗并避免日光直射。

8、注射劑量按疫苗使用說明書規定的劑量，切記不可超大劑量接種。

9、疫苗接種過程中，若由于操作不當或注射器具質量問題會導致個別豬出現漏液、接種劑量不足的情況，要及時發現并補免。

幼畜的母源抗體對疫苗免疫有一定的干擾作用。母源抗體滴度越高，干擾作用越強；疫苗中抗原含量越低，受到的干擾影響也越大，因此要根據母源抗體消長情況來選擇適當的免疫時間和疫苗。

1、對于經產母豬每隔3～4個月普免的豬場，各批次仔豬的口蹄疫母源抗體比較穩定，首免日齡確定后，以后可按照免疫程序正常免疫。首免日齡確定的方法：分別選擇40、50、60、70日齡的仔豬，每個日齡階段20頭，檢測其母源抗體合格率，抗體合格率低于80%的日齡階段即可定為首免日齡。

2、對于經產母豬冬季集中免疫，夏季不免疫的豬場，不同季節生產的仔豬母源抗體水平差異很大，采用同樣的免疫程序，會出現首免過早或過晚的現象，嚴重影響首免和二免的免疫效果。建議調整經產母豬的口蹄疫免疫程序為每隔3～4個月普免一次。

3、對于無條件判定仔豬母源抗體水平情況下，建議在首次免疫時應盡量選擇口蹄疫合成肽疫苗。豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗中含有緬甸98毒、豬毒和豬A型茂名毒3種特異性多肽抗原，每種抗原含量均在25μg/頭份以上，抗原含量非常高，即受到母源抗體干擾的影響相對較小。

動物注射部位出現紅腫現象多由于臨床操作不當引起。

1、由于動物生長環境中病原菌污染嚴重，如金黃色葡萄球菌、腐敗梭菌、鏈球菌、念珠球菌、疥螨等，如果針頭消毒不嚴（生產實踐中往往不是一豬一針頭），易導致注射部位發生感染，即接種后出現注射部位皮膚發紅，繼而腫脹，甚至出現膿腫等臨床表現。

2、未嚴格按照豬的體重選擇合適針頭，導致疫苗打到脂肪中或脂肪與肌肉交界部位。

3、未按要求保定，導致注射部位不準確，疫苗打到脂肪中。

4、采用“飛針”方式注射，在進針或出針的過程中把部分疫苗留在脂肪中。

5、每次大劑量注射疫苗。

6、由于口蹄疫疫苗使用的都是油佐劑，機體對油佐劑的吸收較為緩慢，導致部分豬只注射后局部無菌性腫脹（肉芽腫）。肉芽腫一是由于淋巴細胞、巨噬細胞等參與免疫應答的細胞驅化、集聚所致。但正是油佐劑疫苗的這種緩慢吸收使抗原緩慢釋放，以達到持續刺激機體產生免疫反應，較長的免疫持續期的目的。

1、藥物處理?？善は禄蚣∪庾⑸?.1%鹽酸腎上腺素1～2毫升/頭或靜脈注射5%葡萄糖注射液300～500毫升，維生素C用1克，也可以用地塞米松注射。

2、心臟按壓處理。在注射抗過敏藥物的同時，可實施人工心臟體外按壓，對豬胸腔左側心臟部位按壓后立即放開，過敏反應較輕的豬實施3～5分鐘即可生效。

3、對于體溫升高40.5℃左右的豬可用青霉素加復方氨基比林注射液；對食欲不振的豬還可配合使用維生素B1、維生素B12、維生素C免疫增強劑。

4、動物使用過皮質激素類藥物，如地塞米松、腎上腺素，停藥后需要重新補免疫苗，以使得豬獲得堅強的免疫保護。因為皮質激素類藥物是免疫抑制劑，在免疫過程中會抑制免疫抗體的產生。

5、對妊娠期、新生幼畜慎用地塞米松。地塞米松可興奮子宮平滑肌，導致子宮收縮引起妊娠母豬流產，也可通過血胎屏障，導致胚胎異常發育形成死胎，此外地塞米松干擾鈣的代謝，導致幼畜新陳代謝紊亂和消化不良。

6、地塞米松與多種藥物存在配伍禁忌，例如氯化鈣、磺胺嘧啶鈉、水楊酸鹽、氯丙嗪等等，合用會導致無效甚至中毒，使用時應仔細閱讀說明書。

疫苗免疫是一個非常復雜的機體應答反應過程，多種因素會造成疫苗免疫失敗，主要有以下幾個方面：

一、豬群健康狀況

當動物機體受到免疫抑制性因素影響時，會造成免疫系統功能下降，疫苗抗原免疫應答能力大大減弱，從而影響抗體的產生。如病毒性因素（藍耳病毒、圓環病毒等），細菌性因素（豬支原體肺炎、豬傳染性胸膜肺炎等），霉菌毒素（黃曲霉毒素、赫曲霉毒素等），藥物性因素，營養性因素、應激因素等，都會導致免疫失敗。

二、母源抗體干擾

新生幼畜可通過母乳獲得針對口蹄疫病毒的母源抗體，一般在1~3天達到峰值，其半衰期為21~23天，可在體內存留2個月左右。母源抗體具有雙重作用，一方面能夠保護新生幼畜抵抗病毒感染，但另一方面會嚴重干擾疫苗接種后機體免疫應答的產生。如果接種疫苗時母源抗體水平過高，就會中和疫苗抗原，造成免疫失敗。

三、疫苗毒株與流行毒株匹配程度

根據國家口蹄疫參考實驗室疫情監測結果，目前我國口蹄疫主要流行O型和A型。優勢流行毒株主要以O型緬甸98毒（O/MYA98/BY/2010）和A型豬毒為主（A/GDMM/2013）。

口蹄疫病毒有7個血清型，各血清型之間沒有交叉免疫保護力，同血清型的各拓撲型之間也僅有部分交叉保護力，因此，在接種疫苗時應選擇疫苗毒株與流行毒株高度匹配、抗原譜廣且抗原含量高的疫苗。

四、免疫程序不合理

口蹄疫抗體的產生具有一定規律，免疫過早，容易受到母源抗體的干擾；免疫過晚則會出現免疫空白期。免疫次數過少，不能夠刺激機體產生持久的高水平保護性抗體；免疫次數過多，間隔時間過短，會造成免疫耐受?？茖W合理的免疫程序對于口蹄疫疫苗的免疫至關重要。

五、疫苗保存使用不當

口蹄疫疫苗需要在2~8℃條件下冷藏運輸保存，不可冷凍，而且保存時不要緊貼冰箱壁放置，否則時間長疫苗也會凍結。

一定溫度范圍內，油佐劑口蹄疫疫苗的黏度會隨著溫度的升高而下降。因此，在接種前需要提前把疫苗取出，回溫到20~25℃，減少對免疫動物的冷刺激。

六、接種操作不規范

接種前疫苗需要搖勻，保證劑量均勻，通針性好；接種時使用合適規格的針頭，選擇正確的注射部位，保證疫苗注入肌肉層?！帮w針”注射會導致免疫劑量不足或注射部位不準，導致出現紅腫。

1、在進行緊急免疫時，必須對所有受到威脅的動物逐頭進行詳細觀察和檢查，只能對臨床上沒有癥狀的動物進行緊急疫苗接種。

2、對于病畜應嚴格執行撲殺政策，可能已受到感染的潛伏期病畜，必須在嚴格消毒的情況下隔離，都不能接種疫苗。

3、但是在實際中有一部分潛伏期的動物無臨床癥狀，混在正常動物群體中，這一部分在接種疫苗后不能獲得保護，反而促使其更快發病，甚至發生死亡。因此在緊急接種后一段時間內，畜群中發病數反而出現增多的可能，但發病數在幾天后即下降，由于這種現象的無法完全杜絕，因此在緊急免疫后應加強對畜群的觀察，一旦發現發病動物應嚴加隔離撲殺，以防止發病動物排毒污染環境，感染剛緊急免疫還沒有產生堅強免疫力的易感動物。

1、根據《國家動物疫病監測與流行病學調查計劃》要求，對豬免疫28天后，采集血清樣品進行免疫效果監測。合成肽疫苗采用VP1結構蛋白ELISA試劑盒進行檢測。免疫合格個體數量占群體總數的70%以上。

2、口蹄疫滅活疫苗與合成肽疫苗中有效抗原種類不同，免疫后需選擇不同種類的試劑盒進行檢測，試劑盒中包被的抗原種類直接影響到檢測結果的準確性。豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗要分別選擇O型、A型口蹄疫病毒VP1結構蛋白ELISA抗體檢測試劑盒進行檢測。但由于某些VP1-ELISA試劑盒包被的抗原不完全在VP1結構蛋白中的129~169位，所以檢測結果會出現陽性率低的情況。

口蹄疫病毒是一種多抗原表位，高變異的病毒，現在已了解到O型、A型口蹄疫病毒表面至少有五個抗原位點，其中最主要抗原位點集中在VP1上，如G-H環（133～157）和VP1的線性末端等，它決定著保護性中和抗體的產生，豬口蹄疫O型、A型合成肽疫苗的抗原是以口蹄疫病毒VP1為模板合成了其抗原多肽，因此豬口蹄疫合成肽疫苗具有產生保護性中和抗體的物質基礎；其次，通過國家權威部門用流行毒株對本動物進行疫苗效力檢驗（長期以來被認為是最準確可靠的方法）結果表明，其PD50均在6以上。

口蹄疫病毒由結構蛋白VPl、VP2、VP3、VP4組成的衣殼包裹核酸RNA構成，其中VPl上包含有誘導保護性中和抗體的主要抗原位點，是動物抵抗口蹄疫病毒感染的重要保證，VPl上含多個不同的抗原決定簇，由這些抗原決定簇刺激不同B細胞克隆而產生的多克隆抗體統稱為VPl抗體，不管是自然病毒感染還是疫苗接種，抗原中均含有VPl蛋白，因此動物接種后機體內都會產生VPl抗體。

口蹄疫病毒除由四種衣殼蛋白VPl、VP2、VP3、VP4構成外，病毒在復制過程中還會產生多種非結構蛋白（Nonstructural Protein, NS）如L、2A、2B、2C、3ABC、3D等，由非結構蛋白誘導機體產生的抗體即為NS抗體。這些非結構蛋白中以3ABC的免疫原性和特異性強，感染動物3ABC抗體的持續時間長，感染豬最早能在7～8天檢測出3ABC抗體，抗體持續期可達9個月；感染牛最早可于3～4天檢測出3ABC抗體，持續期通常在9個月以上，少數可達2年，所以通常我們以檢測3ABC抗體作為NS抗體最可靠衡量感染與免疫動物的指標。

動物感染口蹄疫后，活病毒在機體內繁殖時會產生非結構蛋白，進而刺激機體產生NS抗體，所以使用NS抗體檢測試劑盒能檢測出NS抗體的存在。傳統滅活疫苗的抗原成份是完整146S病毒粒子，是利用細胞培養大量繁殖病毒作為抗原，因此疫苗中攜帶有痕量的非結構蛋白，往往多次接種滅活疫苗后可導致NS抗體產生，從而錯誤地將免疫動物判定為感染動物。而合成肽疫苗是只含有VP1主要抗原位點的多肽抗原，是用氨基酸自動合成儀合成抗原多肽，不含任何NS蛋白，使用后當然不會產生NS抗體，因此可通過檢測NS抗體來區分野毒感染動物和免疫接種動物，從這個意義上合成肽疫苗是一種真正完美的DIVA疫苗。

野毒感染和疫苗免疫均能刺激動物機體產生特異性免疫應答。與野毒感染相比，疫苗免疫抗體產生較晚，在免疫后第7天才開始產生抗體，免疫后14天抗體陽性率只有30%左右，第21天也很難達到80%，在28天左右抗體水平達到峰值，并且抗體持續期較短，一般僅能持續4~6個月。因此，農業部明確規定豬口蹄疫疫苗免疫28天后才能采集血清樣品進行免疫效果監測。

雖然動物攻毒保護試驗是作為疫苗免疫效力檢驗最可靠的方法，但是由于這種方法費時費錢，并且只能在特定的環境下進行，實驗受到很大限制，因此人們總是試圖通過體外的抗體水平效價檢測與體內抗感染保護聯系起來，但是在口蹄疫疫苗的免疫中常發現有相同水平的動物抗病能力存在差異，有些動物能抵抗感染，有些動物則仍有易感性，甚至抗體水平低的能保護而效價高的未必有保護作用，McCullough等用一個“灰色區域”評價這一抗體現象，即認為在這個區域內不能通過抗體滴度區分保護動物和易感動物。

上述現象并不是說進行抗體水平監測沒有意義，對豬群進行抗體水平檢測，可以反映豬群免疫狀況及免疫效果，免疫抗體越高，保護力也相對較高。

如果對批次血清樣本檢測抗體合格率低時，請考慮是否存在以下因素影響：

◆試劑盒選擇問題。選擇豬口蹄疫病毒VP1結構蛋白ELISA抗體檢測試劑盒，但由于某些試劑盒包被的抗原不在VP1蛋白中的129~169位，檢測結果會出現全部陰性。

◆檢測操作問題。應嚴格按照試劑盒說明書操作。

◆血樣采集的時間問題。豬口蹄疫合成肽疫苗免疫后一般7天開始產生抗體，21天后抗體陽性率約80％，28天陽性率在90％以上，加強免疫后可達100％。

◆血樣本身問題。血樣是否污染、霉變、保存不當、反復凍融等。

◆免疫操作問題。免疫劑量是否合理、操作是否規范。

◆豬群本身問題。藍耳病毒、圓環病毒等其它疫病造成的免疫抑制。

◆灰色區域問題。如果是個別樣本陽性不合格時，須考慮豬口蹄疫抗體“灰色區域”現象。